练成科研基本功，创新科研好方法

科研实验，取材是关键环节之一。为做好广东省自然科学基金“基于“脾主肌”理论探讨健脾强肌方调控CRTC2/CREB通路介导运动性疲劳糖异生机制的研究”前期实验准备工作，运动医学团队成员开启科研工作培训模式。

取材的准备工作要先做到位，根据自己的实验需求，事先编好管子，备好足够的冰，准备好各种试剂：水合氯醛、多聚甲醛、清洗组织用的生理盐水、PBS、RNA提取液Trizol、WB样品需要提前配好裂解液（RIPA、PMSF、磷酸酶抑制剂）、ELISA样品需要的PBS和蛋白酶抑制剂。然后清点各种耗材和器械：备好匀浆机，提前消毒剪刀、镊子等器械，动物的编号卡、马克笔、注射器、棉球、手套口罩、75%酒精、采血针、采血管、托盘、烧杯、适用的移液枪和枪头，以防万一还需要备点白纸和笔。

工欲善其事，必先利其器，准备工作必须要提前准备好，并提前做好人员分工，各司其职，确保取材过程有序进行，才能尽早结束。

（虾兵蟹将们各司其职，分工合作）

正式取材啦！！！

Step 1 麻醉

腹腔注射水合氯醛，一定要保护好自己，确保老鼠被稳稳抓在手上，不要被动物咬到或抓伤。注射时，针头斜着进针，进入腹腔有落空感后改为垂直腹腔方向，回抽遇到阻力证明在腹腔内，即可推进麻药。拔针后观察大鼠的变化，慢慢出现行走不协调、行动迟缓、到昏迷状态，如果掐爪子没有反应即为麻醉完成，可以进入下一步。

（腹腔注射麻醉）

Step 2 采血

（腹主动脉采血）

腹主动脉采血，先找出腹主动脉，采血针平行血管刺入，确认扎进血管后助手把采血针的另一头扎进负压采血管中，顺利的话马上血流汩汩，根据所测指标的不同，自行选择抗凝管或非抗凝管。采完血后，采血管记得要竖直静置。

Step 3 取脏器称重

采血后先颈椎脱臼处死后再取所需要的脏器，注意要先钝性分离，保持组织的完整性，然后称量脏器重量。

（分离大鼠肝脏）

（称量脏器）

Step 4 胃黏膜组织的修剪与分装

胃组织的处理与分装，因为胃是主要检测的组织，处理比较繁琐细致，不仅是需要拍摄胃黏膜的形态，还需要将胃组织切成几份，分别装到WB、PCR、ELISA和病理切片所需要用到的管子里，尤其是切片用的组织要沿着胃皱襞的方向、找到病变严重的地方仔细修剪才能做出好看的病理切片。

（胃的修剪与分装）

Step 5 后续样品的简单处理

为了保持组织的活性，减少活性物质降解，保证实验数据的有效性，取材后应尽早进行简单的处理，加入相应的裂解液如Trizol等，然后匀浆，再放入-80℃的冰箱保存，之后再进行后续的处理。

（匀浆ing）

除了辛勤劳动，思怡小超人还是要开课的，这次取材是现场教学的好机会。大家都拿好小板凳了，stand by !

（思怡小超人现场教学如何修剪胃黏膜组织）

实验不易，更不易的是遇见一群可以互相依靠、一起进步的实验运动医学团队华小敏，华小升们，训练好一身科研本领，为我们刚获资助的广东省自然科学基金《基于“脾主肌”理论探讨健脾强肌方调控CRTC2/CREB通路介导运动性疲劳糖异生机制的研究》作好实验研究准备。

每个辛勤实验的科研人都能收获到满满的实验果实，为科研之路提交一份满意的答卷。

特别鸣谢以下的小伙伴们的辛勤付出：

作者：罗敏怡 梁绮婷

图片：倪家慧 罗敏怡

指导老师：潘华山